摘要:目的 評價人類脂肪來源成體干細胞(hADASc)體外培養(yǎng)轉基因定向成軟骨誘導的可行性.方法 hADASc體外培養(yǎng)后行PGL3.轉化生長因子β1(TGF-β1)基因轉染并鑒定,檢測轉染細胞Lueiferase活性相對光讀數(shù)(RLU),再行反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)檢測和抗Ⅱ型膠原免疫組織化學染色(實驗組:轉染的hADASc,同比對照組:加入軟骨細胞定向誘導培養(yǎng)基的未轉染hADASc;陰性對照組:未轉染的hADASc),自動圖像分析系統(tǒng)分析免疫染色圖片并計算陽性顆粒(PU)值.結果 人類皮下脂肪體外分離培養(yǎng)出具有干細胞特征的有核組織細胞.hADASc轉染后,實驗組測得RLU值(9 212.583±315.240)高于陰性對照組(317.000±20.710,P<0.01).RT-PCR結果顯示轉染的hADASc表達TGF-β1;免疫染色結果顯示,實驗組與同比對照組呈陽性反應,且兩組PU值(13.864±2.416,13.637±2.548)均與陰性對照組的PU值差異有統(tǒng)計學意義(6.013±0.827,P<0.05).結論 人類皮下脂肪體外分離培養(yǎng)出具有干細胞特征的有核組織細胞.PGL3-TGF-β1基因轉染的hADASc可表達TGF-β1.內(nèi)源性TGF-β1可誘導hADASc分泌Ⅱ型膠原蛋白,與外源性TGF-β1作用相類似.
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