靶向沉默HIF-1α和Survivin基因?qū)Ρ茄拾┞闶笠浦擦龇暖熋舾行缘挠绊?/h2>
作者：向少龍; 劉娟娟; 趙艷; 趙厚育 貴州醫(yī)科大學(xué); 貴州貴陽(yáng)550004; 貴州醫(yī)科大學(xué)分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室; 貴州貴陽(yáng)550004; 貴州醫(yī)科大學(xué)附院耳鼻咽喉科; 貴州貴陽(yáng)550004
摘要：目的：探討RNAi靶向沉默人鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2細(xì)胞缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）和/或生存素（Survivin）基因?qū)β闶笠浦擦龇暖熋舾行缘挠绊?。方法：設(shè)計(jì)合成靶向沉默HIF-1α和/或Survivin的microRNA干擾質(zhì)粒,采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將HIF-1α和/或Survivin的microRNA干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到CNE-2細(xì)胞;取35只4～6周齡的雌性BALA/c裸鼠,隨機(jī)均分為HIF-1α干擾組、Survivin干擾組、HIF-1α＆Survivin干擾組（聯(lián)合干擾組）、空載組和陰性對(duì)照組;分別給予相應(yīng)轉(zhuǎn)染后的CNE-2細(xì)胞注射至裸鼠右側(cè)腋窩皮下,待各組裸鼠成瘤后,給予5Gy X-射線照射,每隔3 d放療1次,共15Gy X-射線,觀察各組裸鼠放療前后的腫瘤體積,照射結(jié)束3 d后處死裸鼠,測(cè)量瘤體體積,計(jì)算腫瘤體積增加率;RT-q PCR法檢測(cè)瘤體組織中的HIF-1α和Survivin mRNA表達(dá)水平,Western Blot法檢測(cè)HIF-1α和Survivin蛋白表達(dá)水平,TUNEL試劑盒檢測(cè)鼻咽癌裸鼠移植瘤中細(xì)胞凋亡。結(jié)果：HIF-1α干擾組、Survivin干擾組與聯(lián)合干擾組經(jīng)過放射治療后腫瘤體積增加率明顯小于空載體組與陰性對(duì)照組（P〈0.05）;HIF-1α干擾組、Survivin干擾組與聯(lián)合干擾組瘤體組織中HIF-1α、Survivin mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平顯著低于空載組與陰性對(duì)照組,細(xì)胞凋亡率高于空載組與陰性對(duì)照組（P〈0.05）;HIF-1α干擾組、Survivin干擾組及聯(lián)合干擾組瘤體組織中HIF-1α、Survivin mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平及細(xì)胞凋亡率比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P〉0.05）。結(jié)論：?jiǎn)为?dú)干擾HIF-1α、Survivin基因與聯(lián)合干擾HIF-1α和Survivin基因均能夠增加鼻咽癌裸鼠移植瘤對(duì)放療敏感性,但聯(lián)合干擾并沒有進(jìn)一步提高鼻咽癌裸鼠移植瘤放療敏感性。
摘要：目的：探討RNAi靶向沉默人鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2細(xì)胞缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）和/或生存素（Survivin）基因?qū)β闶笠浦擦龇暖熋舾行缘挠绊?。方法：設(shè)計(jì)合成靶向沉默HIF-1α和/或Survivin的microRNA干擾質(zhì)粒,采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將HIF-1α和/或Survivin的microRNA干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到CNE-2細(xì)胞;取35只4～6周齡的雌性BALA/c裸鼠,隨機(jī)均分為HIF-1α干擾組、Survivin干擾組、HIF-1α＆Survivin干擾組（聯(lián)合干擾組）、空載組和陰性對(duì)照組;分別給予相應(yīng)轉(zhuǎn)染后的CNE-2細(xì)胞注射至裸鼠右側(cè)腋窩皮下,待各組裸鼠成瘤后,給予5Gy X-射線照射,每隔3 d放療1次,共15Gy X-射線,觀察各組裸鼠放療前后的腫瘤體積,照射結(jié)束3 d后處死裸鼠,測(cè)量瘤體體積,計(jì)算腫瘤體積增加率;RT-q PCR法檢測(cè)瘤體組織中的HIF-1α和Survivin mRNA表達(dá)水平,Western Blot法檢測(cè)HIF-1α和Survivin蛋白表達(dá)水平,TUNEL試劑盒檢測(cè)鼻咽癌裸鼠移植瘤中細(xì)胞凋亡。結(jié)果：HIF-1α干擾組、Survivin干擾組與聯(lián)合干擾組經(jīng)過放射治療后腫瘤體積增加率明顯小于空載體組與陰性對(duì)照組（P〈0.05）;HIF-1α干擾組、Survivin干擾組與聯(lián)合干擾組瘤體組織中HIF-1α、Survivin mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平顯著低于空載組與陰性對(duì)照組,細(xì)胞凋亡率高于空載組與陰性對(duì)照組（P〈0.05）;HIF-1α干擾組、Survivin干擾組及聯(lián)合干擾組瘤體組織中HIF-1α、Survivin mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平及細(xì)胞凋亡率比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P〉0.05）。結(jié)論：?jiǎn)为?dú)干擾HIF-1α、Survivin基因與聯(lián)合干擾HIF-1α和Survivin基因均能夠增加鼻咽癌裸鼠移植瘤對(duì)放療敏感性,但聯(lián)合干擾并沒有進(jìn)一步提高鼻咽癌裸鼠移植瘤放療敏感性。
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